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Shinichi Kudo (工藤 新一 Kudō Shinichi) aussi connu en tant que Conan Edogawa (江戸川コナン
Edogawa Konan) : Le héros se nomme ainsi en hommage à Edogawa Ranpo et Arthur Conan Doyle, deux figures emblématiques du roman policier.
Ran Mouri (毛利 蘭 Mōri Ran): l'amie de Shinichi. Elle et lui sont amoureux l'un de l'autre mais ne se sont pas encore déclaré leur flamme. Ran peut tour à tour être d'un tempérament brûlant ou d'une douceur romantique. Elle est experte en karaté.
Professeur Hiroshi Agasa (阿笠 博士 Agasa Hiroshi) : premier à connaître le secret de Conan, c'est un inventeur farfelu qui crée tous les gadgets de Conan tel son n½ud papillon,sa montre ou encore ses lunettes radar... . Son nom est un hommage à Agatha Christie.
Kogoro Mouri (毛利 小五郎 Mōri Kogorō) : le père de Ran. Ancien policier, il est devenu un détective privé raté, alcoolique et pervers. Se montrant souvent idiot et inefficace, il voit sa carrière reprendre du tonus depuis qu'il héberge Conan qui résout secrètement ses affaires. Il est bon au judo, dont il a appris des gestes à sa femme et sa fille. Son prénom, Kogoro, est fondé sur celui de Kogoro Akechi, héros des romans d'Edogawa Ranpo, et son nom de famille, Mouri, est fondé sur Maurice Leblanc.
Inspecteur Megure (son nom est Juuzou Megure) (目暮 十三Megure Juuzō): inspecteur de la police qui arrive très souvent sur les lieux d'un crime. Portant un gros imperméable et chapeau, c'est un homme droit et sérieux qui a du respect pour Shinichi, et moins pour Kogoro, mais son estime augmente depuis que ce dernier "résout" des affaires avec brio. Le nom de Megure est fondé sur celui du Commissaire Maigret.
Les Détective Boys
Les Détectives Juniors (少年探偵団 Shōnen Tanteidan): Genta Kojima (小嶋 元太 Kojima Genta), Mitsuhiko Tsuburaya (円谷 光彦 Tsuburaya Mitsuhiko) et Ayumi Yoshida (吉田 歩美 Yoshida Ayumi)), camarades de classe de Conan. Il s'agit d'un groupe de jeunes étudiants de primaire, passionnés de mystères et d'aventures. L'arrivée de Conan dans leur classe a été l'élément déclancheur pour la création de leur groupe. En japonais, le nom de leur école est « Teitan » (Tantei, détective, avec les deux syllabes inversées). Pour rendre ce jeu de mots, les traducteurs français l'ont appelé « Tivedétec », inversion de « détective » (le nom original Teitan est repris plus tard dans la série).
Sonoko Suzuki (鈴木 園子 Suzuki Sonoko): la meilleure amie de Ran, c'est une fille un peu folle qui pense surtout à attirer les garçons. Sonoko est la personne que Conan endort et fait passer pour détective le plus souvent après Kogoro.
Heiji Hattori (服部 平次 Hattori Heiji): Le célèbre détective de l'Ouest. Celui-ci provient de la région du Kansai, plus exactement d'Osaka, ce qui fait qu'il parle un Japonais assez particulier: Le dialecte d'Osaka (Osaka-ben). Grâce à sa grande capacité de déduction, celui-ci a découvert la véritable identité de Conan. Celui-ci a le sang chaud et est amoureux de la jeune Kazuha Tooyama.
Kazuha Toyama (遠山 和葉 Tooyama Kazuha) : Provenant également du Kansai, cette jeune fille éprouve un amour envers Heiji (qui, tout comme pour le couple Ran/Shinichi, ils n'osent ni l'un ni l'autre s'avouer leurs sentiments). Ils se sont rencontrés grâce à leurs pères, travaillants tous deux dans la police. Elle pratique l'Aikido.
Inspecteur Yokomizo: un autre inspecteur de police, il est plus jeune que Maigret et a des cheveux frisés. Il a de l'admiration pour Kogoro.
Yusaku Kudo et Yukiko Fujimine: le père et la mère de Shinichi, respectivement écrivain de romans à suspense et ancienne actrice de cinéma.
Eri Kisaki (妃 英理 Kisaki Eri): la femme de Kogoro Mouri et la mère de Ran. Exerçant la profession d'avocat, c'est une femme élégante et sévère qui s'est séparée de son mari à cause de son tempérament de coureur de jupons. Shinichi a peur d'elle parce qu'elle le grondait tout le temps durant son enfance.
Ai Haibara (灰原 哀 Haibara Ai) : son vrai nom est Shiho Miyano. C'est une camarade de classe de Conan, autrefois une jeune femme qui travaillait pour les hommes en noir, l'organisation secrète que Shinichi a découverte. Après que les hommes en noir ont tué sa s½ur, elle s'est révoltée mais a fini emprisonnée. Elle a ensuite avalé elle-même le poison qui avait transformé Shinichi, et a rajeuni. Amoureuse de Conan, elle n'ose pas le lui dire.
Yoko Okino: une belle actrice de cinéma et chanteuse, Yoko se retrouve parfois mêlée aux intrigues sur lesquelles Conan enquête. Kogoro est un de ses grands fans.
Night Baron (le Baron Noir): un personnage inventé par Yusaku Kudo, c'est un dangereux criminel portant cape noire et haut-de-forme noir, avec un masque grimaçant. Conan fera parfois face à des suspects portant ce déguisement.
Kid l'insaisissable: (怪盗キッド Kaitō Kid ) cambrioleur largement inspiré d'Arsène Lupin, il utilise ses talents de déguisement et de prestidigitation pour arriver à ses fins. Incorrigible blagueur, le Kid envoie même à la police japonaise, en langage codé, le lieu et la date de ses futurs vols qu'il restitue généralement. Rival de Conan (avec qui il partage une étonnante ressemblance physique), le Kid fait régulièrement des interventions dans le manga.
L'organisation des hommes en noir (黒の組織 Kuro no Soshiki): La mystérieuse organisation paraît être en fait, au fil de l'histoire, un gros réseau de malfaiteurs. À ce jours, sont ou ont été connus Gin et Vodka, les deux acolytes qui ont fait boire le poison à Shinichi; Vermouth dont le vrai nom est Chris Vinyard (en réalité, l'actrice Sharon Vinyard, amie de la mère de Shinichi ne fait qu'un avec le personnage de sa fille), célèbre actrice américaine; Kir, Chianti et Korn, les derniers arrivants; et enfin Téquila, Pisco et Calvados, membres aujourd'hui morts. L'organisation est dirigée par le "Boss", personnage dont nul ne connait ni nom ni visage.
L'agent Jodie Sterling (Jodie St Emilion ): Cette femme mystérieuse est la prof d'anglais de Ran, Conan la suppose membre de l'organisation (ce que son nom porte à croire puisque le Saint-Emilion est un vin). Dans la traduction française, l'agent Sterling est la belle-fille de Sharon Vinyard et par conséquent la demi-s½ur de Chris Vinyard (Vermouth). Mais dans la version originale, son père, agent du FBI qui enquêtait de près sur Vermouth et l'Organisation, fut tué par Vermouth, ainsi que la mère de Jodie, et leur meurtre maquillé en accident par l'incendie de la maison des Starling. Jodie qui avait miraculeusement survécu, et qui avait rencontré la mystérieuse femme cette nuit-là, fut placée dans un programme de protection des témoins par des amis de son défunt père. En grandissant, elle garda la vengeance de ses parents pour elle et devint à son tour membre du FBI sous le nom de Jodie Saint-Emilion, recherchant activement la femme qui avait tué ses parents. En réalité il ne semble pas que Jodie apparaisse dans l'anime en France, mais dans le manga, elle est mentionnée dès le volume 26, par les camarades de classe de Ran et Shinichi.